上海2022年1月19日 /美通社/ -- 近期，藥明生物首席技術(shù)官、執(zhí)行副總裁周偉昌博士在專業(yè)期刊上發(fā)表了觀點文章，介紹了連續(xù)生產(chǎn)工藝、一次性生物反應(yīng)器等新興技術(shù)對于促進未來生物工藝發(fā)展的作用，并分享了前沿洞見。以下為部分精彩觀點：
自1986年首個單克隆抗體（OKT3）獲批上市以來，F(xiàn)DA已經(jīng)批準了100多個抗體類治療產(chǎn)品，其中包括單克隆抗體（mAb）、融合蛋白、抗體偶聯(lián)藥物（ADC）和雙特異性抗體（bsAb）。
尤其是2014年以來，獲批的抗體類藥物呈爆發(fā)式增長。上市產(chǎn)品超過70個，包括腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、抗PD-1和抗PD-L1抗體等，且重磅藥物頻出。2021年，生物制品的全球銷售額預(yù)計將超過3000億美元1,2。近年來，生物制品在全球藥品銷售排行榜中開始占據(jù)主導地位。例如，2021年的前9個月，銷售額位居前列的20種藥品中有13種是生物制品，其中包括兩款mRNA新冠疫苗和10款抗體類產(chǎn)品。
生物制品結(jié)構(gòu)高度復(fù)雜，通常采用活細胞生產(chǎn)，并需要多個工藝步驟進行純化。其關(guān)鍵特征，即關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA），可以因為細胞內(nèi)或者后續(xù)生產(chǎn)過程中發(fā)生的翻譯后修飾而產(chǎn)生差異。所以，工藝決定產(chǎn)品，基本上可以說“產(chǎn)品即工藝”3。
回顧過去幾十年生物制藥行業(yè)的發(fā)展，盡管還面臨諸多技術(shù)和監(jiān)管挑戰(zhàn)，業(yè)界在開發(fā)生物制品原液和制劑生產(chǎn)工藝，以及分析方法方面的努力已取得了巨大的成就，滿足了大量的臨床需求，拯救了眾多患者的生命。
隨著創(chuàng)新生物藥不斷涌現(xiàn)，如何在確保質(zhì)量一致性的前提下加速產(chǎn)品上市，特別是應(yīng)對不斷變化的新冠疫情，對業(yè)界提出了考驗。如下挑戰(zhàn)正推動著生物工藝創(chuàng)新，為以經(jīng)濟高效的方式保障產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定供應(yīng)帶來了新方向：
加快產(chǎn)品從概念、臨床試驗到商業(yè)化進程
自新冠疫情暴發(fā)以來，業(yè)界迅速響應(yīng)，通過多方協(xié)作加快了多個疫苗（包括兩種mRNA疫苗）和生物藥（包括多種抗體）的研發(fā)和生產(chǎn)。
抗新冠中和抗體產(chǎn)品開發(fā)涵蓋DNA序列設(shè)計，新藥臨床試驗申請以及獲批上市，為加快這一進程，業(yè)界在不影響產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的前提下，采用了一體化和變革性的技術(shù)方法：將產(chǎn)品從DNA到IND申請的時間縮短至3至6個月，并在14個月內(nèi)完成新冠中和抗體從DNA到緊急使用授權(quán)（EUA）的過程。短短數(shù)月內(nèi)就生產(chǎn)了數(shù)千公斤抗體，用于惠及全球患者臨床治療4。
近來，新冠治療藥物研發(fā)達到了前所未有的推進速度，這可能會拉開生物制品研發(fā)變革的序幕，加速開發(fā)時間表也就成為未來生物工藝發(fā)展的重要特征之一。除繼續(xù)應(yīng)用創(chuàng)新技術(shù)縮短研發(fā)時間外，生物工藝開發(fā)也將進一步聚焦于降低生產(chǎn)成本。更新、更小的“未來工廠” -- 綜合應(yīng)用一體化連續(xù)生產(chǎn)工藝、一次性生物反應(yīng)器、高度的數(shù)字化和自動化，不僅將提供更大的靈活性、更高的產(chǎn)量和更有效的空間利用率，同時也將降低生產(chǎn)成本。
新冠疫情為生物工藝帶來的變革也將有助于其他更復(fù)雜生物制品的研發(fā)，如抗體偶聯(lián)藥物和雙特異性/多特異性抗體。業(yè)界從快速研發(fā)新冠疫苗及生物制品中獲得的知識和經(jīng)驗，也將更直接地應(yīng)用于研發(fā)針對其他重癥的新型疫苗和治療性生物藥。未來，新型疫苗和生物藥的研發(fā)將打破傳統(tǒng)，不用再耗時10年之久。
自從治療性生物制品問世以來，為了提高產(chǎn)能和效率，生產(chǎn)用細胞系的選擇策略在不斷改進。這些最新進展使得業(yè)內(nèi)可以重新制定化學、生產(chǎn)和控制（CMC）策略，并在短短三個月內(nèi)生產(chǎn)出供應(yīng)臨床試驗的產(chǎn)品。
DNA合成前的密碼子優(yōu)化是實現(xiàn)高蛋白表達水平的常見方法。其算法基于使用特定宿主細胞系的專用密碼子和密碼子對，可能比基于使用通用密碼子數(shù)據(jù)庫的算法更為有效，有助于提高蛋白質(zhì)在特定宿主細胞系中的表達水平。此外，由于該策略對瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系表達系統(tǒng)均有效，因此定制密碼子的優(yōu)化工作也有助于整個研發(fā)過程。
隨著多年來CMC開發(fā)進程不斷加快，毒理學研究采用從細胞群中獲得的蛋白物料已經(jīng)獲得了全球各監(jiān)管機構(gòu)越來越多的認可。因此，選擇與毒理學研究蛋白具有相似產(chǎn)品CQA的最終克隆至關(guān)重要。需要強調(diào)的是，不采用基于液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）的肽圖分析，而是采用基于下一代測序（NGS）的cDNA，以快速篩選出與早期研發(fā)所用細胞群中無任何序列變異的克隆。在克隆篩選期間，可同時進行細胞系穩(wěn)定性傳代，以進一步縮短研發(fā)時間。
在復(fù)雜生物藥分子的研發(fā)過程中，通常會發(fā)生重組蛋白的截短或裂解，這也為下游純化工藝帶來了挑戰(zhàn)，同時也可能導致產(chǎn)量下降。細胞系選擇的早期階段通常采用批次補料，以篩選出剪切較少的克隆。而這再次證明，在研發(fā)早期深入了解產(chǎn)品和工藝進展有助于節(jié)省后期的大量時間、成本和精力。
更廣泛應(yīng)用連續(xù)生產(chǎn)工藝和一次性生物反應(yīng)器
未來，連續(xù)生產(chǎn)工藝將逐漸廣泛地應(yīng)用單抗、雙抗、融合蛋白和重組蛋白等各種類型的生物藥生產(chǎn)。這一應(yīng)用也反映了業(yè)界發(fā)展趨勢 -- 滿足更高質(zhì)量、更高產(chǎn)量且更具有可及性的生物制品的日益增長的需求。
在上游工藝方面，灌流培養(yǎng)已廣泛應(yīng)用于臨床和商業(yè)批次的生產(chǎn) 。與流加培養(yǎng)相比，灌流培養(yǎng)在產(chǎn)量、質(zhì)量、靈活性和性價比方面均具有顯著優(yōu)勢。先進的灌流培養(yǎng)系統(tǒng) -- 如藥明生物自主開發(fā)的超高效連續(xù)生產(chǎn)技術(shù)平臺（WuXiUP?） -- 可將幾乎所有類型生物藥生產(chǎn)中的細胞密度和產(chǎn)量較流加培養(yǎng)提高5至10倍。此外，連續(xù)收獲可縮短產(chǎn)物在生物反應(yīng)器中的停留時間，從而改善產(chǎn)品質(zhì)量。
藥明生物超高效連續(xù)生產(chǎn)技術(shù)平臺WuXiUP(TM)
隨著一次性生物反應(yīng)器、流穿層析和單向切向流過濾等技術(shù)的進步，連續(xù)生產(chǎn)技術(shù)已經(jīng)在小試或中試規(guī)模成功實現(xiàn)連續(xù)下游工藝。然而，全行業(yè)在大規(guī)模應(yīng)用上的投入?yún)s略顯滯后。
采用自動化穩(wěn)態(tài)灌流培養(yǎng)、不含細胞的連續(xù)收獲和延長產(chǎn)物收獲周期等技術(shù)，使連續(xù)生產(chǎn)上游工藝在產(chǎn)物表達水平方面取得了巨大進步。相應(yīng)地是，在大規(guī)模生產(chǎn)中還需提高連續(xù)生產(chǎn)下游工藝產(chǎn)量5。
人用藥品技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)理事會（ICH）發(fā)布了一份關(guān)于原液和制劑連續(xù)生產(chǎn)的指導原則（Q13）草案6，目前正在對這份草案進行評審。業(yè)界普遍認為該草案將鼓勵連續(xù)生產(chǎn)工藝在生物制品研發(fā)和生產(chǎn)中的應(yīng)用，而連續(xù)生產(chǎn)工藝很大程度上取決于部分或完全一體化的下游工藝單元操作。
對于這兩種連續(xù)生產(chǎn)下游工藝方案，一個可預(yù)見的瓶頸是缺乏高性價比的現(xiàn)成或定制的過程分析技術(shù)（PAT）工具以及用于過程監(jiān)測和實時控制的自動化系統(tǒng)。在儀器和自動化控制解決方案供應(yīng)商、學術(shù)界、工程師及整個生物制藥行業(yè)的協(xié)作努力下，該技術(shù)瓶頸有望在不久的將來得到突破，從而讓完全一體化連續(xù)生產(chǎn)下游工藝得到更廣泛的應(yīng)用。
細胞系開發(fā)策略日趨先進，細胞培養(yǎng)基不斷優(yōu)化，因此細胞培養(yǎng)產(chǎn)物表達水平得以不斷提高，占地面積較小的生物反應(yīng)器的需求也隨之增加。再加上連續(xù)生產(chǎn)工藝，這些將進一步促進一次性生物反應(yīng)器的普及。
擴大一次性技術(shù)在其他環(huán)節(jié)操作中的使用，如引入一次性切向流深層過濾系統(tǒng)和一次性離子交換膜層析裝置，可實現(xiàn)完整的一次性生產(chǎn)工藝。一次性技術(shù)也使得生產(chǎn)工廠的新型設(shè)計成為可能，例如采用模塊化生產(chǎn)單元，從而提供靈活的產(chǎn)能，縮短產(chǎn)品上市時間，不同產(chǎn)品間的靈活轉(zhuǎn)換，同時也可最大限度減少交叉污染。
目前，強化型連續(xù)生產(chǎn)技術(shù)已經(jīng)成為顯著發(fā)展趨勢，這將有望提高采用這些技術(shù)所實現(xiàn)的產(chǎn)量。完全連續(xù)生產(chǎn)工藝可通過整合和協(xié)調(diào)不同單元操作工藝來實現(xiàn)，以最大限度縮短間隙時間和提高產(chǎn)能。采用連續(xù)生產(chǎn)工藝，也將減少大批量生物制品生產(chǎn)所使用設(shè)備的占地面積，并降低整體資本投入。
其他生物工藝進步還包括在大規(guī)模生產(chǎn)工藝中實施自動進料、自動采樣和最小化管路裝配，以實現(xiàn)更大規(guī)模的工藝控制，從而獲得更穩(wěn)健的性能和產(chǎn)品質(zhì)量。大規(guī)模生產(chǎn)中采用過程分析技術(shù)（PAT），如拉曼光譜，以及其他在線檢測方法，可實現(xiàn)重要工藝參數(shù)和性能的實時檢測和控制。
與毛細管電泳（CE）和高效液相色譜（HPLC）相比，基于多肽的多屬性方法（MAM）等其他新型分析技術(shù)具有更高的靈敏度和產(chǎn)物選擇性。此外，表面等離子體共振（SPR）和生物層干涉（BLI）等新興技術(shù)可加強產(chǎn)品放行中的工作流程。
應(yīng)用PAT工具有兩項主要優(yōu)勢：快速決策和先進的過程控制?，F(xiàn)在行業(yè)內(nèi)已開發(fā)多種PAT平臺，可用于在線監(jiān)測連續(xù)性生物工藝過程中的產(chǎn)物聚集化和碎片化度7，以及自動控制活細胞密度8，這有助于開發(fā)更好的工藝，并加快CMC開發(fā)進度。
新一代抗體類藥物工藝發(fā)展趨勢
由于分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，雙抗和抗體偶聯(lián)藥物等新型生物藥的工藝開發(fā)具有一定挑戰(zhàn)性。隨著全球抗體偶聯(lián)藥物研發(fā)產(chǎn)品線快速增長，業(yè)界對完全一體化的抗體偶聯(lián)藥物技術(shù)平臺服務(wù)的需求愈發(fā)強烈，以支持從DNA到 IND過程中的工藝開發(fā)和產(chǎn)品生產(chǎn)等環(huán)節(jié)。生物偶聯(lián)藥物的研發(fā)和生產(chǎn)不僅需要這些完全一體化的抗體偶聯(lián)藥物技術(shù)平臺，也需要抗體、連接子和偶聯(lián)技術(shù)等相關(guān)服務(wù)。除縮短DNA到IND的時間，一體化的抗體偶聯(lián)藥物技術(shù)平臺還具有降低開發(fā)過程中的風險等優(yōu)勢。對這些技術(shù)平臺的需求，也反映出研發(fā)企業(yè)對偶聯(lián)工藝穩(wěn)健性和藥物-抗體比（DAR）控制的更多關(guān)注。
偶聯(lián)技術(shù)涉及各種連接子機制以及不同的有效載荷、偶聯(lián)化學品、偶聯(lián)位點和藥物-抗體比。所有方面的多樣性也增加了生產(chǎn)過程中的可變性，使純化工藝和對抗體偶聯(lián)藥物結(jié)構(gòu)和效價的分析過程變得復(fù)雜。在過去數(shù)年里，抗體偶聯(lián)藥物研發(fā)企業(yè)在改善這些復(fù)雜藥物的可開發(fā)性、可生產(chǎn)性和功能性能等方面取得了重大進展，但在將這些藥物模式推向更精簡的研發(fā)過程中，仍然面臨一定挑戰(zhàn)。為應(yīng)對這些困難，生產(chǎn)企業(yè)需要采用更高水平的分析方法。
在雙抗生產(chǎn)過程中，鏈錯配、鏈表達不平衡和組裝不完全等工藝過程中產(chǎn)生的相關(guān)副產(chǎn)物對下游純化工藝提出了相當大的挑戰(zhàn)。為幫助生產(chǎn)企業(yè)處理不同種類及含量水平的副產(chǎn)物，研究人員提出了一種基于工具箱的雙抗純化方法9。
除了為雙抗量身定制的下游方法外，灌流細胞培養(yǎng)還可以顯著提高雙抗的質(zhì)量（例如，通過提高單體的百分比，其以Caliper或者毛細管等電聚焦分析確定）。因此，相比傳統(tǒng)的補料分批培養(yǎng)，灌流細胞培養(yǎng)是更好的選擇方法10。本文所討論用于雙抗研發(fā)的下游和上游策略也可應(yīng)用于多特異性抗體研發(fā)。
盡管生物制品研發(fā)仍然存在相關(guān)挑戰(zhàn)，尤其是抗體偶聯(lián)藥物和雙抗等新型和復(fù)雜的藥物分子，但業(yè)界已通過新型分析工具、高通量矩陣驅(qū)動的實驗設(shè)計來應(yīng)對這些挑戰(zhàn)。相對于多年以前，得益于以藥明生物為代表的更加全面、一體化和單一來源的生物技術(shù)賦能平臺，以及吸取抗擊新冠疫情中生物藥研發(fā)的相關(guān)知識經(jīng)驗，企業(yè)將更快實現(xiàn)研發(fā)出性價比更高的治療性生物藥和疫苗。
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原文鏈接：https://www.genengnews.com/topics/bioprocessing/secure-the-future-of-bioprocessing/
